MMP—9在胃癌细胞中的表达及意义

摘 要 目的：探讨MMP-9在人胃癌细胞SGC7901、BGC-823中的表达及意义。方法：选择两种不同的胃癌细胞（人胃癌转移淋巴结细胞SGC7901，人胃低分化腺癌细胞BGC-823细胞），采用细胞免疫化学SABC法对两种胃癌细胞中MMP-9表达情况进行检测和分析。结果：MMP-9在两种胃癌细胞中都高表达，且差异有统计学意义（P<0.01）。结论：MMP-9在胃癌细胞SGC7901中的高表达与其细胞的转移能力密切相关。

关键词 胃癌细胞 金属蛋白酶-9 细胞免疫化学doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2012.30.214

胃癌是我国消化道最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率占肿瘤的首位，本研究选择胃癌细胞株SGC7901、BGC-823，旨在研究MMP-9在胃癌细胞中的表达情况，探讨MMP-9在促进胃癌细胞侵袭转移中的作用。

资料与方法

细胞及试剂：人胃癌转移淋巴结细胞SGC7901购自武汉生命科学细胞中心，人胃低分化腺癌细胞BGC-823细胞购自武汉博士德生物工程有限公司。RPMI-1640购自Gibeo公司；MMP-9单克隆抗体购自北京中杉金桥有限生物公司；DAB显色试剂盒及即用型（鼠/兔）SABC免疫组化染色试剂盒购自北京中衫生物技术有限公司。PIRA裂解液购自北京中衫生物技术有限公司。

方法：①细胞培养：将复苏的胃癌细胞SGC7901、BGC-823细胞分别接种于5ml培养液的培养瓶中，在37℃二氧化碳的恒温培养箱内（CO2浓度为5%）培养2～3天，所用的培养液1640均含10%小牛血清、青霉素、链霉素个1U/ml，每天观察培养细胞的生长情况，根据培养液的颜色变化，每1～2天换一次培养液，待培养细胞长满培养瓶底70%～80%时备用。②细胞免疫化学法：常规消化细胞，制备细胞悬液，将细胞经胰酶消化收集后，并调整细胞密度为2×105/ml。将高压灭菌的盖玻片放入6孔培养板内，常规培养。弃去培养基，PBS清洗细胞3次，在各细胞爬片上滴加一抗工作液MMP-9，37℃孵育1～2小时。PBS冲洗5分钟×3次。滴加生物素标记二抗工作液，37℃孵育10～30分钟；同上洗涤。滴加SABC，37℃孵育10～30分钟；DAB显色，苏木精复染后常规脱水、透明、封片。镜下观察并摄片。

结果判定标准：MMP-9阳性细胞均表现为细胞核内含棕黄色颗粒。在光镜下，结合免疫细胞化学染色强度和阳性细胞率两个参数，综合判定MMP-9的阳性染色。用BioMias图像处理系统在100倍镜下选取癌视野中5个区域，分别在高倍镜（400×）下随机选择25个视野。采用Image Pro Plus 5.0图像分析软件检测阳性染色的积分光密度值（IOD）。

统计学处理：采用SPSS13.0统计软件，数据以X±S表示，根据数据来源和统计学要求进行重复测量的方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。

结 果

免疫细胞化学法检测MMP-9在胃癌细胞中的蛋白表达：MMP-9在胃癌细胞株中阳性表达均呈棕黄色，并且主要表达于癌细胞浆和/或细胞膜，在转移性的胃癌细胞SGC7901细胞中表达（5381.209±1738.744）明显高于BGC-823细胞（4634.018±1017.023），两种细胞的差异有统计学意义（P<0.01）。提示MMP-9的表达和转移与否有密切相关。

讨 论

细胞的恶性增殖与肿瘤的发生、浸润及转移密切相关。而转移是恶性肿瘤主要的生物学行为之一，也是肿瘤复发和预后的重要指标。已经众多研究证明，肿瘤细胞浸润转移的能力与其产生和诱导降解细胞外基质的蛋白酶的能力密切相关[1]。基质金属蛋白酶（MMPs）是一组重要的细胞外基质降解酶，可通过对细胞外基质的降解促进肿瘤细胞对周围组织的浸润转移能力。其中最重要的是MMP-2和MMP-9。

Kowluru RA等[2]在研究中发现，MMP-9在有淋巴结转移的肿瘤中的表达高于非转移性肿瘤。Cha MC等[3]对多种恶性肿瘤组织中的MMPs进行研究，认为MMP-9与大肠癌关系最为密切。Cha MC[3]研究发现，随肿瘤浸润程度的增加，分化程度的变差或伴有淋巴结的转移，MMP-9的阳性表达率明显增高。本研究结果表明转移的胃癌细胞SGC7901中MMP-9表达明显高于BGC-823细胞，证实了MMP-9在促进胃癌淋巴结转移中的作用。因此检测MMP-9在胃癌中的表达情况将有助于临床医师更准确评估患者的预后，并指导临床制定更合理的治疗方案。

参考文献

1 No JH，Jo H，Kim SH，et al.Expression of MMP-2，MMP-9，and urokinase-type plasminogen activator in cervical intraepithelial.Neoplasia，2009，1171：100-104.

2 Kowluru RA.Role of Matrix Metalloproteinase-9 in the Development of Diabetic Retinopathy and its Regulation by H-RasInvest.Ophthalmol Vis Sci，2010（10）：150.

3 Cha MC，Purslow PP.The activities of MMP-9 and total gelatinase respond differently to substrate coating and cyclic mechanical stretching in fibroblasts and myoblasts.Neoplasia，2010（11）：205.

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